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液相色谱分析中保留时间改变的原因

色谱分析是以假定给定组分的保留值在分离条件不变时保留值恒定为基础的。对标准的液相色谱程序而言,每个峰都对应于一个组分,以标准品与样品中组分的保留时间相对应进行鉴别。恒定的保留时间对分析设计排列的样品很重要。
液相色谱仪分析中常涉及到组分的保留值。保留值发生改变可使已建立的方法不能继续进行下去,或引起分析周期太长,或者峰分不开。应该找出引起保留值变化的原因。

除上述条件之外,引起保留变化的原因主要包括下列3种:
1 柱-柱之间;
2 日-日或日内:保留时间可能随时间而变化,如温度、柱温、pH值等对柱性能有影响,通常是所有的峰提前或延迟。
3 样品-样品间:偶尔也有样品与标准品的保留时间不同,可能是样品介质的影响。
以下重要讨论造成日-日间和日内保留时间变化的影响因素,它们主要是:
a 分离条件控制差
除了色谱柱外,保留是温度、流动相组成和流速的综合体现,如果有一个条件变化,保留时间也会随之发生变化。
b 柱平衡慢
流动相组成或温度变化时,柱在新条件下再平衡需要一定的时间,在柱达到完全平衡钱不应进样。
c 柱钝化
长时间进样,柱会退化,强保留组分被柱不可逆的保留,导致所有组分保留减少。键合相层从填料微粒上剥落下来,会导致某些组分的保留增加,而另一组分的保留减少。
d 柱过载和样品介质相互作用
过大的样品量超出柱的线性范围,使保留减少。也可能是样品本身过载,从其它方面影响保留。

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