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油脂类产品中抗氧化剂的(HPLC)检测方案

食品在储存、加工和流通过程中,食品中的油脂类组分易因氧化作用引起变色或变味并会生成有害物质,特别是油脂和富脂食品常因氧化而酸败。添加抗氧化剂可防止食品成分氧化变质。近半个世纪以来,在油脂和富脂食品中加入抗氧化剂以抑制或延缓食品在加工或流通储存过程中氧化变质已成为食品加工中的常规手段。

饮食中抗氧化剂长期以来倍受国内外学者关注,这是因为:1.食物中抗氧化剂能够保护食物免受氧化损伤而变质。2.在人体消化道内具有抗氧化作用,防止消化道发生氧化损伤。3.吸收后可在机体其他组织器官内发挥作用。4.来源于食物的某些具有抗氧化作用的提取物可以作为治疗药品。抗氧化剂的作用机理包括鳌合金属离子、清除自由基、淬灭单线态氧、清除氧、抑制氧化酶活性等。

以下是油脂类产品中抗氧化剂的测定的详细检测方法。

1??仪器与试剂

1.1?仪器
??LC-600A高效液相色谱仪(双泵梯度系统,带反控软件);
??Vertex?色谱柱?250mm×4.6mm×5μm
??液体混匀器;
??旋转蒸发仪;具塞离心管;
??比色管;
??万分之一天平;
??0.45μm微孔滤膜。

1.2?试剂
??正己烷:分析纯,重蒸。
??乙腈:色谱纯。
??异丙醇:分析纯,重蒸。
??甲醇:色谱纯。
??乙酸:分析纯。
??乙腈饱和正己烷:正己烷中加入乙腈饱和。
??正己烷饱和乙腈:乙腈中加入正己烷饱和。
??抗氧化剂标准品:没食子酸丙酯(PG)、2,4,5-三羟基苯丁酮(THBP)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)、去甲二氢愈创木酸(NDGA)、叔丁基对羟基茴香醚(BHA)、2,6-二叔丁基-4-羟甲基苯酚(Ionox-100)、没食子酸辛酯(OG)、2,6-二叔丁基对甲基苯酚(BHT)、没食子酸十二酯(DG)。
??抗氧化剂标准工作液:用甲醇-异丙醇(1+1v/v)配成合适的浓度。

2??测定原理
??油脂样品用正己烷溶解,用乙腈提取其中的抗氧化剂,提取液经浓缩后,用异丙醇定容,用高效液相色谱紫外检测器检测,外标法定量。

3??色谱条件
??色谱柱:Vertex?色谱柱?250mm×4.6mm×5μm??????????
??流动相:1.5%乙酸-甲醇(A,1.5%乙酸-水溶液(B)。梯度洗脱0min-5min?? A30%5min-20minA30%增至8020min-30minA80%
??流速:1 mL/min
??进样量:20μL
??检测波长:280nm

4??试样溶液的制备
??称取油脂1g(精确至0.01g)于离心管中,加入5mL乙腈饱和的正己烷,在液体混匀器上快速混匀以充分溶解油样,加入10mL正己烷饱和的乙腈,一液体混匀器上快速1min,静置分层,用胶头滴管将乙腈层转入比色管中。如上操作提取两次,合并乙腈于比色管内。乙腈在40度下用旋转蒸发仪浓缩至近干,用异丙醇定容至2mL,经0.45μm微孔滤膜过滤,上机分析。

5??结果分析
??在添加2mg/kg-200mg/kg范围内,回收率在82.5%-98.7之间,相对标准偏差小于5%。色谱图如下图所示,其峰型较好,满足日常检测要求。

?

?

仪器配置:

型号名称

配置

数量

?

?

液相色谱仪LC-600A

(智能全控)

?

UV600紫外检测器

??1台

P600恒流泵(0.001~9.999ml/min?

2台

美国原装进口7725i进样阀(含支架)

1只

100ul进样针

1只

梯度混合器

1只

工具包(含管路托盘)

1只

液相色谱柱

250×4 .6,5um ??C18进口

1

分析天平

200g.1mg

1

旋转蒸发仪

?

1

JL-120DTH超声波清洗器

加热 ???3L

1

KJ330色谱柱温箱

恒温误差±0.1

1

溶剂过滤器

含真空泵

1

滤膜

有机、水系过滤膜 ?2

有机、水系过滤器 ?2盒 ???

1

流动相储液瓶

?

2

电脑、打印机

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