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鱼粉中氨基酸的高效液相色谱(hplc)检测方案

随着5139 vip威尼斯人国饲料工业的发展,鱼粉的需要量逐年增加,鱼粉的质量问题越来越引起饲料行业、养殖业的重视。鱼粉是水产饲料的主要蛋白源,尤其含有动物生长所必需的氨基酸,由于鱼粉用量大,价格高,有些厂家掺杂使假、以次充好,使鱼粉质量参差不齐,这一行为业给鱼粉品质分析带来了一定困难。因此,有必要建立一个有效的手段对鱼粉中氨基酸进行定量分析。

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鱼粉图片

1、仪器与试剂

? ??LC-600高效液相色谱仪(南京科捷)

? ? 色谱柱:C18 ?250mm×4.6mm×5μm

? ? 分析天平

? ? 恒温箱,温度控制在110±1℃

? ? 微量进样器,(20μL)一支

? ? 漩涡混匀器

? ? 氮吹仪

? ? 针头过滤器

? ? 微孔滤膜:0.45?m

? ? 1.2试剂

? ? 盐酸溶液,6mol/L:将优级纯盐酸与水按1:1(V/V)混合。

? ? 氨基酸标准工作溶液。

? ? 乙腈,色谱纯。

? ? 三水合醋酸钠,优级纯。

? ? 冰醋酸。

? ? 正己烷,色谱纯。

2、供试品溶液和对照品溶液的制备

对照品溶液的制备 ? 取氨基酸混合工作标液500ul,用水稀释至5ml,即得。

供试品溶液的制备 ? 称取试样50-100mg(准确至0.1mg)于据塞试管中,加入6.0mol/l盐酸10ml,混匀,充分提取10min,盖紧盖子。将样品置于110℃恒温干燥箱中,水解22-24h。冷却后充分混匀,过滤。根据实验要求移取适量上清液,60℃下氮气吹干,备用。以下按照衍生方法包进行。

方法包衍生方法:将恒温水浴锅预热至50±1℃,分别将A、B两种衍生试剂用稀释至原来浓度的1/5倍。精密量取上述对照品1ml,至于试管中,加入稀释后的A溶液0.5ml和稀释后的B溶液0.5ml,摇匀;在50±1℃的水浴中加热45分钟,取出,加入正己烷溶液1ml,振摇;并用孔径为0.45μm有机膜过滤,放置30min后,取澄清的下层液进行分析实验。供试品的衍生步骤与对照品相同。

3、色谱条件

? ?色谱柱:AA ?4. 6 mmx250 mm,粒度5 ?m

? ??流动相:

? ? 流动相A:0.1mol/L醋酸钠溶液(pH6.5):乙腈=93:7

? ? 配置方法:准确称取三水合醋酸钠13.6g于1000ml水中,搅拌均匀,溶解,用冰醋酸或氢氧化钠溶液调节pH值至6.5; 准确量取配制好的三水合醋酸钠溶液465ml和乙腈35ml,混合均与,抽滤,过0.45μm滤膜。

? ? 流动相B:水:乙腈=20:80。

??? 配制方法:准确量取水100ml和乙腈400ml,混合均匀,抽滤,过0.45μm滤膜。

? ? 波长:254nm

? ? 流速:1. 0 mL/min

? ?梯度设置:

?

4、测定法

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20ul,注入液相色谱仪,测定,即得

5、谱图 ?

?

?

?

仪器配置:

型号名称

配置

数量

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液相色谱仪LC-600

(智能全控)

P600宝石恒流泵(0.001~9.999ml/min???

UV600紫外检测器(190~700nm

Rehodyne7725I手动进样阀

20uL定量环(美国)

梯度混合器

工具包

2台

1台

1只

1只

1只

1套

液相色谱柱

250×4 .6,5um ??C18进口

1

色谱工作站(可反控主机)

电脑、打印机自配

1

JL-120DTH超声波清洗器

3L

1

KJ330色谱柱温箱

?

1

溶剂过滤器(真空泵)

?

1

滤膜、滤器

有机、水系0.45

1

25ul进样器

?

1

电脑、打印机

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1

旋涡混合器

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1

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氮吹仪

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1

标准物质

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1



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