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玉米赤霉烯酮的高效液相色谱HPLC检测方案

【玉米赤霉烯酮】

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玉米赤霉烯酮是一种酚的二羟基苯酸的内酯结构,分子式为C18H22O50它不溶于水、二硫化碳和四氧化碳,溶于碱性水溶液、乙醚、苯、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯和酸类,微溶于石油醚。由于玉米赤霉烯酮是一种内酯的结构,因此在碱性环境的条件下可以将酯键打开,当碱的浓度下降时可将键恢复。玉米赤霉烯酮又称F-2毒素,玉米烯酮。它首先从有赤霉病的玉米中分离得到。玉米赤霉烯酮主要污染玉米、小麦、大米、大麦、小米和燕麦等谷物,其中玉米的阳性检出率为45%,最高含毒量可达到2909mg/kg;小麦的检出率为20%,含毒量为0.364~11.05mg/kg。玉米赤霉烯酮的耐热性较强,110℃下处理1h才被完全破坏。?

【作用】

玉米赤霉烯酮主要由禾谷镰刀菌产生,粉红镰刀菌、窜珠镰刀菌、三线镰刀菌等多种镰刀菌也能产生这种毒素。许多农作物如小麦、大豆等植物中也存在玉米赤霉烯酮。玉米赤霉烯酮有许多种衍生物,例如7一脱氢玉米赤霉烯酮、玉米赤霉烯酸、8一羟基玉米赤霉烯酮。同时,植物中的玉米赤霉烯酮结构和对生物体的影响与霉菌产生的玉米赤霉烯酮作用是一致的,这也为5139 vip威尼斯人预防玉米赤霉烯酮中毒提供了一条途径。玉米赤霉烯酮是一种特殊毒性的生物毒素,具有类雌激素样作用,能引起动物流产、死胎、返情等生殖机能异常,还可以导致生长下降、免疫抑制、不育、畸形等。国内外学者做了大量的研究,来揭示玉米赤霉烯酮损害机体的机制。它主要通过影响机体的生殖性能,引起细胞凋亡、致畸、损伤DNA、氧化损害、影响免疫机能等机制,来影响动物与人类的健康。??

【样品处理过程】

标准储备液(0.1mg/ml):准确称取一定量标准品,用甲醇+乙腈(1+1)溶解,配成0.1mg/ml的标准液。标准工作液:根据使用需要准确吸取一定量的玉米赤霉烯酮储备液,用流动相稀释,分别配成相当于10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、500ng/ml的标准工作液。用0.45?m的有机系滤膜过滤,精密量取20?L,注入液相色谱仪,记录色谱图。

样品处理:将样品研磨,硬质的粮食用高速万能粉碎机磨细并通过试验筛,不要磨成粉末,称取50g(精确到0.01g)磨碎的试样与100mL容量瓶中,加入5gNaCl,用提取液(乙腈+水(9+1))定容至刻度,混匀,转移至均质杯中高速搅拌提取2min,定量滤纸过滤,移取10mL滤液于50mL容量瓶中加水定容至刻度,混匀,用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清,收集滤液于干净的容器中。
????? ?净化、洗脱:将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下,准确移取滤液10mL注入玻璃注射器中,将空气压力泵与玻璃注射器相连接,调节压力,使溶液以约1滴/s的流速通过,直至空气进入亲和柱中,依次用10mLPBS清洗缓冲液和10mL水淋洗免疫亲和柱,流速约为1滴/s-2滴/s直至空气进入亲和柱中,弃去全部流出液抽干小柱,加入1mL甲醇洗脱,再用甲醇定容至1mL。

【色谱条件】
????? 色谱柱: C18反相色谱柱, 4.6 mm*250 mm,粒度5 ?m
????? 流动相:甲醇:水:乙腈=8:46:46
????? 波长:λex274nm?? λem440nm
????? 流速:1.0mL/min
????? 进样量:20?L
????? 柱温:30℃??

【谱图】

?

【仪器配置】

型号名称

配置

数量

?

?

液相色谱仪LC-600A

(智能全控)

?

荧光检测器

??1台

P600恒流泵(0.001~9.999ml/min?

1台

美国原装进口7725i进样阀(含支架)

1只

100ul进样针

1只

工具包(含管路托盘)

1只

液相色谱柱

250×4 .6,5um ??C18进口

1

分析天平

200g.1mg

1

旋转蒸发仪

?

1

JL-120DTH超声波清洗器

加热 ???3L

1

KJ330色谱柱温箱

恒温误差±0.1

1

溶剂过滤器

含真空泵

1

滤膜

有机、水系过滤膜 ?2

有机、水系过滤器 ?2盒 ???

1

流动相储液瓶

?

2

电脑、打印机

?

1



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