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赭曲霉毒素的高效液相色谱HPLC检测方案

赭曲霉毒素由曲霉菌,如赭曲霉、硫色曲霉、蜂蜜曲霉以及绿青霉等产生的一类毒素。
包括7种结构类似的化合物,结构通式:R1=Cl或H;R2=H、CH3或C2H5。其中赭曲霉毒素A(R1=C1,R2=H)毒性最大,在霉变谷物、饲料等最常见。
赭曲霉毒素A是一种无色结晶化合物。可溶于极性有机溶剂和稀碳酸氢钠溶液。微溶于水。其苯溶剂化物熔点94~96℃,二甲苯中结晶熔点169℃。有光学活性[α]D-118°。其紫外吸收光谱随pH值和溶剂极性不同而有别,在乙醇溶液中最大吸收波长为213nm和332nm。有很高的化学稳定性和热稳定性。?

【作用】
赭曲霉毒素A是由多种生长在粮食(小麦、玉米、大麦、燕麦、黑麦、大米和黍类等)、花生、蔬菜(豆类)等农作物上的曲霉和青霉产生的。动物摄入了霉变的饲料后,这种毒素也可能出现在猪和母鸡等的肉中。赭曲霉毒素主要侵害动物肝脏与肾脏。这种毒素主要是引起肾脏损伤,大量的毒素也可能引起动物的肠黏膜炎症和坏死。还在动物试验中观察到它的致畸作用。?

【样品处理过程】
标准储备液:准确称取一定量标准品,用甲醇+乙腈(1+1)溶解,配成0.1mg/ml的标准液。标准工作液:根据使用需要准确吸取一定量的赭曲霉毒素储备液,用流动相稀释,分别配成相当于1ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml的标准工作液。用0.45?m的有机系滤膜过滤,精密量取10?L,注入液相色谱仪,记录色谱图。
样品处理:准确称取试样50.0g(准确到0.1g)于均质器配置的搅拌杯中,加入5.0g氯化钠,加入100mL甲醇+水(8+2)将搅拌杯置于均质器上,于20000r/min高速搅拌提取1min。提取液经槽纹折叠滤纸过滤于干净的烧杯中。准确移取10.0mL滤液并加入40.0mL水稀释,混合均匀,经玻璃纤维滤纸直接过滤入10mL注射器。
净化过程略。?

【色谱条件】
色谱柱: C18反相色谱柱, 4.6 mm*250 mm,粒度5 ?m
流动相:水+乙腈+冰乙酸=102+96+2
波长:λex333nm?? λem460nm
流速:1.0mL/min
进样量:10?L
柱温:30℃?

【谱图】

?

仪器配置:

型号名称

配置

数量

?

?

液相色谱仪LC-600A

(智能全控)

?

荧光检测器

??1台

P600恒流泵(0.001~9.999ml/min?

1台

美国原装进口7725i进样阀(含支架)

1只

100ul进样针

1只

工具包(含管路托盘)

1只

液相色谱柱

250×4 .6,5um ??C18进口

1

分析天平

200g.1mg

1

旋转蒸发仪

?

1

JL-120DTH超声波清洗器

加热 ???3L

1

KJ330色谱柱温箱

恒温误差±0.1

1

溶剂过滤器

含真空泵

1

滤膜

有机、水系过滤膜 ?2

有机、水系过滤器 ?2盒 ???

1

流动相储液瓶

?

2

电脑、打印机

?

1

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