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猪血中免疫球蛋白IgG的高效液相HPLC检测方案

【免疫球蛋白】

免疫球蛋白:指具有抗体活性的动物蛋白。主要存在于血浆中,可溶性免疫球蛋白存在于体液中,参与体液免疫 ,也见于其他组织和一些分泌液中。人血浆内的免疫球蛋白大多数存在于丙种球蛋白(γ-球蛋白)中。免疫球蛋白可以分为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五类。?

IgG生理作用】

人体血清免疫球蛋白IgG是初级免疫应答中最持久、最重要的抗体,它仅以单体形式存在。大多是抗菌性、抗毒性和抗病毒抗体属于IgG,它在抗感染中起到主力军作用,它能够促进单核巨噬细胞的吞噬作用(调理作用),中和细菌毒素的毒性(中和毒素)和病毒抗原结合使病毒失去感染宿主细胞的能力(中和病毒)。IgG 在机体合成的年龄要晚于IgM,在出生后第3 个月开始合成,3-5 岁接近成年人水平。它是唯一能通过胎盘的Ig,在自然被动免疫中起重要作用。此外,IgG 还具有调理吞噬和结合SPA等作用。

1、仪器与试剂

? 1.1仪器、设备

??LC-600高效液相色谱仪(南京科捷)

? 蛋白柱

? 分析天平

? PH计

? 容量瓶

? 针头过滤器

? 微孔滤膜:0.45?m

? 1.2试剂

? 磷酸二氢钾(AR)

? 磷酸氢二钾(AR)

2、供试品溶液和对照品溶液的制备

对照品溶液的制备 ? 取IgG标准品0..01g,用流动相A溶解并定容至10.0ml,摇匀,即得标准储备液,浓度为1mg/ml;取适量该储备液用流动相A稀释成含IgG0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/ml的标准系列,临用时配制。

供试品溶液的制备 ?称取一定量的血浆蛋白粉试样约0.1g于容量瓶中,用流动相A稀释至25.0ml,摇匀,经0.45um微孔滤膜过滤后进样分析。

3、色谱条件

? 色谱柱:蛋白柱

? 流动相:流动相A:PH6.5,0.05mol/l磷酸盐缓冲液

? 流动相B:PH2.5,0.05mol/l甘氨酸盐缓冲液

? 梯度洗脱程序见下表

? 波长:280nm

? 流速:0.4mL/min

? 进样量:20ul

? 温度:室温

梯度洗脱程序

?

4、测定法

? 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20ul,注入液相色谱仪,测定,即得

5、谱图

?

?

?

?

【仪器配置】

型号名称

配置

数量

?

?

液相色谱仪LC-600A

(智能全控)

?

UV600紫外检测器

??1台

P600恒流泵(0.001~9.999ml/min?

2台

美国原装进口7725i进样阀(含支架)

1只

100ul进样针

1只

梯度混合器

1只

工具包(含管路托盘)

1只

液相色谱柱

250×4 .6,5um ??C18进口

1

分析天平

200g.1mg

1

酸度计

?

1

JL-120DTH超声波清洗器

加热 ???3L

1

KJ330色谱柱温箱

恒温误差±0.1

1

溶剂过滤器

含真空泵

1

滤膜

有机、水系过滤膜 ?2

有机、水系过滤器 ?2盒 ???

1

流动相储液瓶

?

2

电脑、打印机

?

1

?

?

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